環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗報告

　　一、實(shí)驗目的

　�。�1）了解普通光學(xué)顯微鏡的構造及原理，掌握顯微鏡的操作及保養方法。（2）觀(guān)察、識別幾種原核微生物。真核微生物的個(gè)體形態(tài)，學(xué)會(huì )生物圖的繪制。

　　二、實(shí)驗器皿與材料

　�。�1）器皿：顯微鏡、擦鏡紙、二甲苯。

　�。�2）材料：示范片：細菌三形（球狀、桿狀、螺旋狀）、弧狀（硫酸鹽還原菌）、絲狀（浮游球衣菌等）、細菌鞭毛及細菌莢膜。放線(xiàn)菌、顫藍細菌、微囊藍細菌或念珠藍細菌等。

　　三、實(shí)驗步驟

　�。�1）將標本片放在載物臺上，使觀(guān)察的目的物置于圓孔正中央。（2）將鏡頭換成低倍鏡，將粗調節器向下旋轉（或載物臺向上旋轉），眼睛注視物鏡。當物鏡的尖端距離載玻片約0.5cm處時(shí)停止旋轉。

　�。�3）左眼對著(zhù)目鏡觀(guān)察，將粗調節器向上旋轉，如果見(jiàn)到目的物，但不十分清楚，可用細調節器調節，直至目的物清晰。此時(shí)找到目的物并移至中央。（4）換成高倍鏡，觀(guān)察目的物，旋轉細調節鈕，直至視野清晰。（5）觀(guān)察示范片，繪出其形態(tài)圖。

　　四、思考題

　�。�1）使用油鏡時(shí)，為什么要先用低倍鏡觀(guān)察？答：為了找到目的物并移動(dòng)到中央。

　�。�2）要使視野明亮，除采用光源外，還可采取哪些措施？

　　答：調大孔徑光闌，調整光源。如果是用反光鏡的顯微鏡，用凹面鏡可使視野明亮。

　　五、生物圖

　　實(shí)驗二、微生物培養基的配制與滅菌

　　一、實(shí)驗目的

　�。�1）熟悉玻璃器皿的洗滌和滅菌前的準備工作。

　�。�2）了解配置微生物培養基的基本原理，掌握配置、分裝培養基的方法。（3）學(xué)會(huì )各類(lèi)物品的'包裝、配置（稀釋水等）和滅菌技術(shù)。

　　二、實(shí)驗器皿與材料

　�。�1）實(shí)驗器皿：高壓蒸汽滅菌器、干燥箱、煤氣燈、培養皿、試管、刻度移液管、錐形瓶、燒杯、兩桶、藥物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉網(wǎng)、藥匙、鐵架、表面皿、pH試紙和棉花等。

　�。�2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和瓊脂等。

　　三、實(shí)驗原理

　　培養基是微生物生長(cháng)的基質(zhì)，是按照微生物營(yíng)養、生長(cháng)繁殖的需要，由碳、氫、氧、氮、磷、硫、鉀、鈉、鈣、鎂、鐵及微量元素和水，按一定的體積分數配置而成。調整合適的pH，經(jīng)高溫滅菌后以備培養微生物之用。由于微生物種類(lèi)及代謝類(lèi)型的多樣性，因而培養基種類(lèi)也多，它們的配方及配制方法也各有差異，但一般的配制過(guò)程大致相同。

　　四、實(shí)驗步驟

　　1、取100mL蒸餾水倒入錐形瓶；

　　2、稱(chēng)取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，瓊脂20g；3、用100g/LNaOH調節pH至7.2~7.4；4、蓋上棉塞，121℃下滅菌15~20min。

　　五、思考題

　　1、固體培養基加瓊脂后加熱溶化時(shí)要注意哪些問(wèn)題？答：（1）加熱器功率不能太高，也不能太低。太高，容易沸騰和把培養基燒

　　焦；太低，培養基容易凝固。

　�。�2）受熱要均勻，可以墊上石棉網(wǎng)，要用玻璃棒不停緩慢攪拌。

　�。�3）加熱完畢后，要在合適的溫度（60℃左右）倒平板，防止凝固。2、培養基中加瓊脂的作用是什么？答：瓊脂的作用就是讓培養基凝固。3、如何檢查培養基滅菌是否徹底？

　　答：將滅菌后的培養基按滅菌鍋內不同位置,每處抽取數管標號,置25至30

　　攝氏度培養一周左右進(jìn)行檢查,若培養基無(wú)什么變化說(shuō)明滅菌效果較好

　　實(shí)驗三、細菌的革蘭氏染色

　　一、實(shí)驗目的

　�。�1）了解細菌的涂片及染色在微生物學(xué)實(shí)驗中的重要性。

　�。�2）學(xué)會(huì )細菌染色的基本操作技術(shù)，從而掌握微生物的一般染色法和革蘭氏染色法。

　　二、染色原理

　　微生物細胞由蛋白質(zhì)、核酸等兩性電解質(zhì)及其他化合物組成。所以，微生物表現出兩性電解質(zhì)的性質(zhì)。兩性電解質(zhì)兼有堿性基和酸性基，在酸性溶液中解離出堿性基，呈堿性帶正電；在堿性溶液中解離出酸性基，呈酸性帶負電。經(jīng)測定，細菌等電點(diǎn)（pI）在2~5之間時(shí)，大多以?xún)尚噪x子存在，當細菌在中性、堿性或偏酸性溶液中時(shí)，細菌帶負電荷，所以容易與帶正電荷的堿性染料結合，故用堿性染料染色的為多。

　　微生物體內各結構與染料結合力不同，故可用各染料分別染微生物的各結構以便觀(guān)察。

　　三、實(shí)驗器皿、試劑、材料

　�。�1）器皿：顯微鏡、接種環(huán)、載玻片、酒精燈。

　�。�2）試劑：草酸銨結晶紫染液、革蘭氏碘液、體積分數為95%的乙醇、質(zhì)量濃度為5g/L的沙黃染色液等。

　�。�3）材料：枯草桿菌、大腸桿菌。

　　四、實(shí)驗步驟

　�。�1）涂片：載玻片滴一滴蒸餾水蘸菌染勻（2）初染：用草酸銨結晶紫染液染色1~2min后水洗（3）媒染：用革蘭氏碘液染色1~2min后水洗

　�。�4）脫色：滴加體積分數為95%的乙醇，約45s后水洗（5）復染：滴加番紅染色2~3min后水洗并干燥（6）鏡檢：用顯微鏡觀(guān)察菌體形態(tài)

　　五、思考題

　�。�1）要得到正確的革蘭氏染色結果必須注意哪些操作？關(guān)鍵在哪幾步？為什么？

　　答：應注意干燥時(shí)不要用火燒太久。關(guān)鍵在于涂片，涂片的時(shí)候要注意涂均勻，并且兩個(gè)菌的量也要差不多，否則太厚的地方脫色就不均勻了。

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